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組織原位ALP染色試劑盒

貨號(Cat.):CB2307      保存(Store):避光,-20     規格:100T  價(jià)格:300

原理介紹:

堿性磷酸酶(ALP)在哺乳動(dòng)物中主要存在于肝臟、骨骼和腎臟。成骨細胞能夠分泌堿性磷酸酶,是骨形成所必需的酶,是成骨細胞分化和功能成熟的早期標志。了解骨代謝狀態(tài)是研究細胞生理活性的一個(gè)有效方法。對ALP染色后可了解成骨細胞的骨形成情況,其原理是采用偶氮偶聯(lián)法,在pH9.2~9.8的堿性條件下,細胞內堿性磷酸酶可使AS-BI磷酸鹽水解,釋放出的磷酸萘酚,不偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物,定位于細胞質(zhì)中。

適用于:骨細胞涂片、骨組織冰凍切片、骨組織石碏切片等,觀(guān)察成骨細胞的染色結果,檢查細胞的分化狀態(tài)和骨組織的分布情況。僅供研究,不得用于診斷。

試劑盒組分:

1.核染色試劑··············10 mL(用核染色試劑使各種細胞核呈藍綠色。)

2.堿性磷酸酶預混物溶液····30 mLALP染色劑使成骨細胞的細胞膜、軟骨細胞和細胞間膜呈茶褐色)

樣品前期處理:

注:ALP染色使用不能用福爾馬林固定的新鮮材料,如果未在短時(shí)間內固定,會(huì )導致酶失活,因此推薦80%乙醇固定。ALP酶是含有金屬Zn蛋白。通過(guò)脫鈣處理,酶的組成成分Zn被去除,導致酶失活。為彌補此缺點(diǎn),需要添加ZnSO4,作為ALP活化劑,也可嘗試添加相同螯合劑EDTA溶液,染色結果會(huì )更好。

實(shí)驗步驟:

材料獲取→固定→脫脂脫鈣→脫水、包埋→切片、干燥→染色、封片→鏡檢。

陽(yáng)性結果判斷:ALP的活性部位呈藍色或茶褐色;ALP酶活性染色使用的是預混物溶液,簡(jiǎn)單適用,骨組織切片(脫鈣GMA樹(shù)脂包埋切片)或培養的細胞。

 

組織原位TRAP染色試劑盒

貨號(Cat.):CB2308      保存(Store):避光,-20     規格:100T  300

產(chǎn)品原理介紹:

抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)為破骨細胞的特異性標志酶,只出現在特異性細胞中,主要用于檢測骨、骨細胞中破骨細胞的染色,破骨細胞呈紅色,細胞核淺藍色。TRAP分布廣,遍布各種組織,存在于細胞的溶酶體內,溶酶體標志酶。pH4.55.5。血液中的TRAP絕大多數來(lái)源于破骨細胞,通過(guò)測量血液中的TRAP了解破骨細胞的功能狀態(tài)。當底物中存在酒石酸時(shí),細胞內抗酒石酸酸性磷酸酶催化底物水解,生成不溶性的偶氮染料沉淀,用TRAP染色劑使破骨細胞呈紅色,可檢查細胞的分化狀態(tài)和骨組織的分布情況。

適用于:新鮮血涂片、細胞涂片,亦可用于冰凍切片、石蠟切片等。本染色試劑盒適用于生物或藥物研究。僅供研究,不得用于診斷。

試劑盒組分:

1.酒石酸溶液(×10)·······3 mL

2. 酸性磷酸酶底物液A······30 mL

3. 酸性磷酸酶底物液B······3 mL

4. 核染色試劑··············10 mL(用核染色試劑使各種細胞核呈藍綠色。)

樣品前期處理:

實(shí)驗步驟:

材料獲取→固定→脫脂脫鈣→脫水、包埋→切片、干燥→染色、封片→鏡檢

結果判斷:以萘酚二磷酸鹽為底物,偶氮副品紅為顯色劑,TRAP在酒石酸鉀鈉存在條件下將萘酚AS-BI磷酸鹽水解為萘酚AS-BI,與顯色劑結合形成紅色沉淀,定位于細胞質(zhì)中,若細胞內的ACP有抗酒石酸的活性,則呈陽(yáng)性反應。




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